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May / Jun 2014 . vol. 12 / núm. 2
Avances en técnicas de UPLC y química de columnas para ayudar en la confirmación de la biosimilitud
El manejo automatizado de la muestra, el análisis de glicanos avanzado, y las columnas especialmente diseñadas están ayudando a los fabricantes de biosimilares a acelerar la confirmación de la biosimilitud de sus productos.
BIOSIMILARES
Cynthia A. Challener, PhD
El manejo automatizado de la muestra, el análisis de glicanos avanzado, y las columnas especialmente diseñadas están ayudando a los fabricantes de biosimilares a acelerar la confirmación de la biosimilitud de sus productos.
Además de caracterizar exhaustivamente las propiedades fisicoquímicas/estructurales de una proteína/glicoproteína biosimilar (APIs y terapéuticos formulados), los fabricantes de biosimilares deben demostrar la comparabilidad con el biológico innovador. La biosimilitud se logra modificando el proceso de producción hasta que produce un producto que es similar al fármaco innovador, determinado a través de una extensa caracterización. Inicialmente, los lotes de la molécula innovadora son evaluados para determinar la secuencia exacta de aminoácidos, cualquier modificación post-traslacional, y el nivel de variabilidad del atributo estructural con el tiempo. Una vez fabricado, la estructura del biosimilar debe entonces ser confirmada y los datos comparados directamente con los de la proteína innovadora. “Demostrar un alto nivel de similitud entre el biosimilar y el fármaco de marca puede tener un gran impacto en el proceso de aprobación para el biosimilar; menos diferencias se traducen a un menor riesgo y la oportunidad para la reducción de la experiencia clínica necesaria para la aprobación,” señala Scott Berger, gerente senior del Pharmaceutical and Life Science Team (Equipo Farmacéutico y de Ciencias de la Vida) en Waters Corporation.
Como resultado, deben llevarse a cabo pruebas para determinar el peso molecular y el tamaño, la secuencia y composición de aminoácidos, el mapa de péptidos, incluyendo la ubicación de grupos sulfhidrilo y puentes disulfuro, otras modificaciones post-traslacionales, tales como desamidación y oxidación, el grado de heterogeneidad, la estructura del carbohidrato, el patrón de pegilación, y perfiles de impurezas y degradación. También deben obtenerse varias huellas analíticas, incluyendo los patrones electroforéticos y cromatográficos de líquidos y varios perfiles espectroscópicos (p.ej., ultravioleta-visible, dicroísmo circular). Se utilizan numerosas técnicas ortogonales para estos análisis para detectar más definitivamente cualquier diferencia en el biosimilar y el biológico de marca, y muchas de estas técnicas involucran la separación vía cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) o, con más frecuencia hoy en día, cromatografía de líquidos de ultra-alta presión (UHPLC).
Necesidad de múltiples modos cromatográficos
Uno de los más grandes desafíos que enfrentan los fabricantes de biosimilares es la necesidad de hacer un monitoreo extenso de los atributos del producto utilizando múltiples modos de cromatografía de líquidos a lo largo del desarrollo del proceso, incluyendo mapeo de péptidos, ensayos de variante de carga, intercambio iónico (IEX), y cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) por nombrar unos pocos, de acuerdo a Berger.
El primer obstáculo es deformular con exactitud el fármaco innovador sin afectar la estructura de la proteína, la cual con frecuencia es muy sensible al medio ambiente. Muchos métodos analíticos no pueden llevarse a cabo directamente utilizando el fármaco formulado debido a que la presencia de surfactantes, acarreadores y otros ingredientes pueden influir en los resultados. “El químico necesita estar consciente de estos problemas potenciales, particularmente si los análisis se realizarán en diferentes niveles de pH y de fuerza iónica que el producto formulado. Los métodos ortogonales son particularmente valiosos en esta etapa,” señala Berger.
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